文献类型： 中文期刊
作者： 赵晓杰 1 ; 陈松林 2 ; 王娜 3 ; 王贤丽 4 ; 邢士超 5 ;
作者机构： 1.中国海洋大学海洋生命学院
2.中国水产科学研究院黄海水产研究所
3.农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室
4.上海海洋大学
5.上海高校水产养殖学E-研究院
关键词： 胰岛素样生长因子-I;cDNA克隆;重组表达;包涵体;融合蛋白
期刊名称： 水产学报
ISSN： 1000-0615
年卷期： 2010 年 34 卷 01 期
页码： 1-7
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 通过RT-PCR方法从大菱鲆肝组织克隆了胰岛素样生长因子-I(IGF-I)成熟肽片段,分析表明,此成熟肽由70个氨基酸残基组成,含有3个链内二硫键。将扩增片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,实现了IGF-I成熟肽和GST蛋白在Escherichia coli BL21(DE3)plysS中的融合表达。融合蛋白分子量约为34ku,诱导4h时占菌体总蛋白的59%,主要以包涵体形式存在。Western-blotting免疫印迹表明,融合蛋白可以特异性地被anti-GST抗体识别。包涵体经6mol/L盐酸胍变性溶解及脉冲法稀释复性后,通过GSTrapFF亲和预装柱纯化,获得了电泳分析纯的融合蛋白。以细胞增殖实验检测蛋白生物活性,结果显示,纯化蛋白能促进大菱鲆肾脏细胞的增殖。
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