文献类型： 中文期刊

作者： 蔡海松 ¹ ; 林晓栩 ¹ ; 郭永华 ¹ ; 陈龙军 ¹ ; 张慧 ¹ ; 邱宏端 ² ; 林新坚 ¹ ; 陈济琛 ¹ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院土壤肥料研究所

2.福州大学生物科学与工程学院

关键词： 环糊精葡萄糖基转移酶;信号肽;化学通透剂;胞外分泌

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2017 年 44 卷 03 期

页码： 601-610

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】研究不同的信号肽和化学通透剂对重组环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)胞外分泌的影响,提高CGTase的胞外分泌量。【方法】扩增地芽孢杆菌CHB1(Geobacillus sp.CHB1)的CGTase基因,构建带有地芽孢杆菌CHB1自身信号肽、Omp A、Pel B信号肽和不带信号肽的4种重组质粒;比较4种重组质粒对重组CGTase胞外分泌的影响,筛选最优的信号肽;考察甘氨酸、Triton X-100、SDS和Tween 80四种化学通透剂对重组CGTase胞外分泌的影响,确定最佳的化学通透剂及其浓度。【结果】Omp A信号肽介导的分泌效果最好,胞外酶活达到7.44 U/m L,分别是Pel B、CHB1信号肽的2.04倍和11.27倍,不带信号肽的重组质粒菌胞外检测不到酶活;携带Omp A信号肽的重组质粒菌发酵48 h,同时添加浓度为0.6%的甘氨酸和0.3%的Triton X-100,胞外酶活达最大到14.27 U/m L;SDS和Tween 80对该酶的胞外分泌具有明显的抑制作用。【结论】Omp A信号肽的介导效果最佳,同时添加浓度为0.6%和0.3%的甘氨酸和Triton X-100可以有效促进胞外分泌,为该重组酶的高效胞外分泌提供了一种有效的方法。