文献类型： 中文期刊
作者： 吴晓平 1 ; 张红星 2 ; 吴异健 1 ; 韩典霖 1 ; 王劭 3 ;
作者机构： 1.福建农林大学动物科学学院
2.广西农业大学
3.福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心
关键词： 番鸭呼肠孤病毒;σB蛋白;序列分析;原核表达
期刊名称： 病毒学报
ISSN： 1000-8721
年卷期： 2013 年 29 卷 02 期
页码： 185-191
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,DRV)是造成雏番鸭高死亡率的重要病原体,深入其检测与免疫研究对于防控DRV感染意义重大。利用RT-PCR和测序技术,对3株福建DRV分离株的S3基因进行序列分析,发现DRV-YH、YJL株与禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)遗传距离较近,同源性高达94.6%～98.9%,而DRV-YB株与ARV同源性仅为60.6%～61.7%。构建和鉴定DRV YB株重组原核表达质粒pET-30a-S3,并转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE表明,表达的目的蛋白分子量约为42ku,IPTG最适诱导浓度为0.1mM,最适诱导时间为5h,最适诱导温度为37℃,以包涵体形式存在。薄层扫描显示重组DRVσB蛋白占菌体总量的67.7%。以Ni 2+柱亲和层析纯化蛋白,纯化后的目的蛋白纯度为93%,质量浓度为0.86g/L。Western blot分析该融合蛋白能与抗DRV阳性血清发生特异性反应,表明重组DRVσB蛋白具有良好的免疫反应性。
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