文献类型： 中文期刊

作者： 杨蕾蕾 ¹ ; 毛立 ¹ ; 李基棕 ¹ ; 江杰元 ¹ ; 刘茂军 ¹ ; 张纹纹 ¹ ; 孙敏 ¹ ; 李文良 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地

关键词： 裂谷热病毒;双重荧光定量RT-PCR;鉴别;NSs基因;L基因;模拟物

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN：

年卷期： 2020 年 011 期

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收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立一种能够鉴别检测裂谷热病毒野毒株与NSs缺失型疫苗株的荧光定量RT-PCR方法,本研究通过对裂谷热病毒基因组序列进行比较分析,选择其S节段NSs基因及L节段L基因的无二级结构且保守的区段,分别设计多对引物和探针,通过试验验证并优化反应条件,筛选出最佳引物和探针的组合,建立了可以快速检测裂谷热病毒并区分NSs基因缺失疫苗株和野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法.利用该方法检测羊临床常见病原,结果显示该方法仅对裂谷热质粒标准品样品检测为阳性,不与羊常见的其他病原出现阳性反应,特异性强;将裂谷热质粒标准品10倍倍比稀释后利用本研究建立的方法进行检测,结果显示,该方法对NSs和L基因重组质粒标准品的检测下限分别为10拷贝/μL和100拷贝/μL,敏感度高;重复性实验结果显示,该方法组内和组间变异系数均小于2%,重复性好.将NSs缺失型和非缺失型质粒分别转染细胞,提取核酸,利用本方法进行检测,结果显示该方法可有效区分NSs基因缺失型和非缺失型核酸样品.本研究建立的双重荧光定量RT-PCR方法为鉴别野生病毒株和NSs缺失型疫苗株奠定了技术基础.