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含甘露糖异构酶基因植物表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 孙磊 1 ; 张国军 1 ; 闫爱玲 1 ; 徐海英 1 ;

作者机构： 1.北京市农林科学院林业果树研究所

关键词： 甘露糖异构酶基因;标记基因;植物表达载体;克隆

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2012 年 22 卷 04 期

页码： 18-21

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:构建了以manA基因为选择标记的植物表达载体。方法:从大肠杆菌DH5α中克隆出manA基因,连接到质粒pCAMBIA1301的XhoⅠ位点,替换hpt基因,通过酶切和PCR检测了插入片段的正确性,使用XbaⅠ和HindⅢ酶切Gateway载体(pGWCBF)获得含有P35S-T35S-attR1-attR2-CmR-ccdB的结构域,将其插入到表达载体pCAMBIA1301的相应位点中,获得中间表达载体pCAMBIA1301-manA-GW,使用Gateway载体的BP反应与LR反应,将转录因子CBF基因片段整合到载体中。结果:酶切结果表明以甘露糖异构酶基因(manA)为选择标记的植物表达载体pCAMBIA1301-manA-CBF已经构建完成。结论:将构建好的载体用液氮冻融法转化到农杆菌中,可以用于葡萄的遗传转化研究,为将来获得安全的转基因抗寒植株奠定基础。

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