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甘蔗锌指蛋白ShZP基因正义反义植物表达载体的构建及转化烟草

文献类型： 中文期刊

作者： 喻时周 1 ; 张树珍 1 ; 杨本鹏 1 ; 蔡文伟 1 ; 罗遵喜 1 ; 顾丽红 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： 甘蔗;锌指蛋白;植物表达载体;遗传转化

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2009 年 30 卷 09 期

页码： 114-120

收录情况： CSCD

摘要： 根据本实验室克隆的甘蔗锌指蛋白ShZP基因cDNA序列,在开放阅读框两侧设计特异引物,通过PCR扩增引入相应的酶切位点,把甘蔗ShZP基因的编码区(大小为725bp)cDNA片段,分别以正向和反向插入到中间载体pCRBI的Prd29A启动子和NOS终止子之间,构建了其正义植物表达载体pCRBIShZP和反义表达载体pCRBIantiShZP。采用冻融法分别将pCRBIShZP和pCRBIantiShZP导入根瘤农杆菌菌株EHA105中,通过农杆菌介导法对烟草进行转化,经过12mg/L的PPT连续抗性筛选,共获得23株抗性植株,对其中的5株转正义基因烟草植株和9株转反义基因烟草植株进行PCR检测,分别获得3株转正义基因的阳性植株和4株转反义基因的阳性植株。PCR检测结果初步证明外源甘蔗锌指蛋白ShZP基因已成功整合到烟草基因组中,这一研究为植物抗逆基因工程研究打下了一定的基础。

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