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瓜实蝇DNA甲基化的MSAP体系建立与优化

文献类型： 中文期刊

作者： 龚治 1 ; 周世豪 2 ; 马华博 2 ; 张亚楠 2 ; 符悦冠 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院环境与植物保护研究所

2.海南大学

关键词： 瓜实蝇;DNA甲基化;甲基化敏感扩增多态性;表观遗传

期刊名称： 热带农业科学

ISSN： 1009-2196

年卷期： 2016 年 36 卷 05 期

页码： 37-43

摘要： 瓜实蝇[Bactrocera cucurbitae(Coquillett)]是中国重要的蔬菜害虫,但其DNA甲基化研究尚未见报道。甲基化敏感扩增多态性是研究DNA甲基化的重要技术之一。通过对酶切反应、连接、PCR扩增和引物筛选等条件优化,建立瓜实蝇MSAP反应体系,即:120μL酶切体系中加入10 U的限制性内切酶与600 ng基因组DNA,于37℃酶切反应过夜;220μL连接体系中加入T4连接酶1 U,HpaⅡ-MspⅠ-adapter接头50 pmol,Eco R I-adapter接头5 pmol,并于16℃反应12 h;3连接产物稀释后进行PCR预扩增和选择性扩增,再经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测结果。通过该体系筛选出适用于瓜实蝇基因组DNA甲基化多态性研究的6对引物;瓜实蝇MSAP体系为瓜实蝇的表观遗传学研究提供了技术支持。

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