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绿色木霉几丁质酶基因Tvchi cDNA的克隆、原核表达与活性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 杨丽荣 1 ; 孙虎 1 ; 雷振生 2 ; 赵献林 2 ; 全鑫 1 ; 薛保国 1 ;

作者机构： 1.河南省农业科学院植物保护研究所/河南省农作物病虫害防治重点实验室/农业部华北南部作物有害生物综合治理重点实验室

2.河南省农业科学院小麦研究中心

关键词： 绿色木霉;几丁质酶基因;基因克隆;原核表达

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2012 年 42 卷 02 期

页码： 139-145

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用RT-PCR方法从绿木霉ZBS-6中扩增了几丁质酶基因Tvchi,序列分析表明Tvchi开放阅读框为1 293 bp,编码430个氨基酸残基,Blast分析表明,与多种木霉18家族内切几丁质酶具有较高的同源性。将该基因克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western印迹分析表明成功的获得了47 kD的融合蛋白。该融合蛋白经Ni-NTA柱亲和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白Tvchi。Tvchi最适酶活温度为37℃,最适酶活pH值为6.8。表达产物对小麦全蚀病、赤霉病、纹枯病病原菌显示出较好的抑菌活性。本研究结果将为进一步研究木霉几丁质酶的应用提供了基础。

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