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正交设计优化莲雾ISSR-PCR反应体系

文献类型： 中文期刊

作者： 张立杰 1 ; 李韬 1 ; 魏秀清 1 ; 章希娟 1 ; 陈志峰 1 ; 许家辉 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院果树研究所

关键词： 莲雾;ISSR;体系优化;正交设计;引物筛选

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2012 年 27 卷 04 期

页码： 343-349

摘要： 以莲雾品种‘农科一号’为试材,采用经改良的CTAB法提取莲雾叶片的DNA,探讨了Mg2+、dNTPs、引物浓度、Taq聚合酶、模板DNA含量对莲雾ISSR-PCR的影响。建立了总体积为25μL的莲雾ISSR-PCR反应体系:Mg2+浓度为3.0mmol.L-1﹑dNTP浓度为0.2mmol.L-1﹑primer浓度为0.4μmol.L-1﹑Taq DNA聚合酶1.5U﹑模板DNA含量为30ng,并含2.0μL 10×PCR Buffer(Mg2+free)。应用该反应体系对‘农科一号’和‘农科二号’进行ISSR-PCR扩增,共筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。

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