文献类型： 中文期刊

作者： 熊爱生 ¹ ; 彭日荷 ¹ ; 李贤 ¹ ; 范惠琴 ¹ ; 姚泉洪 ¹ ; 郭美锦 ² ; 张嗣良 ² ;

作者机构： 1.上海市农业科学院生物技术研究中心、上海市农业遗传育种重点实验室

2.华东理工大学生物工程学院

关键词： 毕赤酵母;信号肽序列;表达载体;高效表达

期刊名称： 生物化学与生物物理学报

ISSN： 0582-9879

年卷期： 2003 年 02 期

页码： 154-160

收录情况： SCI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 乙醇氧化酶启动子被分离、克隆 ,并建立了转化方法后 ,毕赤酵母已被发展成为一种高效的外源蛋白表达宿主。为了进一步提高外源蛋白质的分泌表达 ,对信号肽序列进行了研究。首先按毕赤酵母的偏爱密码合成了酿酒酵母的α因子信号肽序列MF4I,随后在MF4I信号肽序列的N端分别引入 1～ 10个毕赤酵母Aox1蛋白质的N端氨基酸 ,构成 10种不同的分泌信号肽序列 ,10种不同的分泌信号肽序列被用于植酸酶基因的毕赤酵母分泌表达。以上新的信号肽序列都可使植酸酶的分泌表达量增加 ,而以N端增加A、I、P三个氨基酸的信号肽序列引起的提高最大 ;和野生型的酿酒酵母α因子信号肽序列相比 ,使植酸酶分泌表达量增加 5倍 ,摇瓶中植酸酶的分泌表达量为 90mg/L。此外在MF4I信号肽的引导序列和内切蛋白酶间增加了EEAEAEAEP和K共 10个氨基酸 ,进一步提高信号肽的分泌效率 ,使表达又提高约 35 % ,使得摇瓶中酸性植酸酶的表达量达到 12 0mg/L ,是pPCI9K表达量的 8倍。