文献类型： 中文期刊
作者： 张圳 1 ; 王松 1 ; 孙铭飞 2 ; 胡建和 1 ; 王丹妮 1 ; 朱惠丽 1 ;
作者机构： 1.河南科技学院动物科技学院
2.广东省农业科学院动物卫生研究所
关键词： 柔嫩艾美耳球虫;EtMIC1;原核表达;免疫原性;SDS-PAGE分析;Western-blot鉴定
期刊名称： 黑龙江畜牧兽医
ISSN： 1004-7034
年卷期： 2023 年 020 期
页码： 77-82
收录情况： 北大核心
摘要： 为了解原核表达柔嫩艾美耳球虫微线蛋白1（Eimeria tenella microneme 1,EtMIC1）重组蛋白的免疫原性，试验以柔嫩艾美耳球虫广东株孢子化卵囊为材料，首先采用PCR技术扩增去除信号肽的EtMIC1基因，将其插入原核表达载体pET-32a（+）中，构建重组原核表达载体，然后将重组原核表达载体pET32a（+）-EtMIC1转化至大肠杆菌T7pLysY感受态细胞中，用IPTG进行诱导表达，最后对重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果表明：PCR扩增出大小为2 055 bp的去信号肽EtMIC1基因片段，与预期结果一致；构建的重组原核表达载体pET32a（+）-EtMIC1可在大肠杆菌T7pLysY感受态细胞中表达，重组蛋白分子质量大小约为93 ku,主要表达在上清液中，可被自然感染抗柔嫩艾美耳球虫鸡血清和EtMIC1重组蛋白多克隆抗体特异性识别。说明试验成功表达了EtMIC1重组蛋白，原核表达的EtMIC1重组蛋白具有良好的免疫原性。
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