文献类型： 中文期刊

作者： 尤琳烽 ¹ ; 杨海星 ¹ ; 林俊芳 ¹ ; 柳永 ² ; 叶志伟 ¹ ; 郭丽琼 ¹ ; 辛燕花 ¹ ;

作者机构： 1.华南农业大学食品学院

2.浙江省农科院植物保护与微生物研究所

关键词： 灰盖鬼伞;牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶;紫杉二烯合酶;紫杉二烯;组合生物合成

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2015 年 31 卷 03 期

页码： 375-383

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 紫杉二烯是紫杉醇合成途径中的前体物质。紫杉醇是红豆杉的一种重要的次级代谢产物,是一种重要的新型抗癌药物。然而,紫杉醇在植物中含量低且难提取,限制了高效应用。利用基因工程手段,借助担子菌类真菌灰盖鬼伞具有的内源类异戊二烯合成途径,构建含有牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸(Geranylgeranyl diphosphate,GGPP)合酶和紫杉二烯合酶的融合基因表达载体p Bg GGTS和独立表达盒表达载体p Bg GGg TS,并分别转入灰盖鬼伞LT2菌株中,经过选择性筛选、PCR鉴定、Southern blotting杂交验证,分别获得了5株融合表达的灰盖鬼伞工程菌和5株独立表达盒的灰盖鬼伞工程菌株。各随机挑选了1株工程菌株,分别提取菌丝体和发酵液分析。GC-MS分析表明,两种工程菌株与原出发菌株的菌丝提取物无明显差异峰,而与出发菌株的发酵液提取物相比,两种转基因灰盖鬼伞的发酵液中均出现了明显的差异峰,采用GC-MS特征质量离子分析方法判定为紫杉二烯,分别为44 ng/L(转化p Bg GGg TS)和30 ng/L(转化p Bg GGTS)。结果表明,通过在灰盖鬼伞融合基因或各自独立表达的形式共表达ggpps和ts基因,可以生物合成紫杉二烯。