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单克隆抗体间接免疫荧光检测猪瘟病毒方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 许保疆 1 ; 游一 1 ; 郭成留 1 ; 王川庆 2 ;

作者机构： 1.河南省农业科学院畜牧兽医研究所

2.河南农业大学牧医工程学院

关键词： 猪瘟病毒;单克隆抗体;间接免疫荧光

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2010 年 30 卷 12 期

页码： 1566-1570

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以作者制备的抗猪瘟病毒单克隆抗体(anti-CSFV McAb)为一抗、荧光素标记羊抗小鼠IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立检测猪瘟病毒抗原的间接免疫荧光(IFA)检测方法。确定IFA最佳工作条件:CSFV最佳接种浓度和培养条件为CSFV 10-3倍稀释后接种PK15细胞,37℃5%CO2恒温箱中培养36 h;McAb最适工作浓度为1∶1 000倍稀释;荧光素标记的羊抗小鼠IgG荧光抗体的最适工作浓度为1∶50倍稀释。特异性试验表明,用建立的IFA检测方法检测CSFV感染PK15细胞为阳性,而检测伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪2型圆环病毒(PCV-2)感染PK15细胞均为阴性。结果表明,建立的检测细胞培养中CSFV抗原的IFA检测方法具有敏感特异、简便快速等优点,可用于CSFV感染的实验室诊断及CSFV在感染细胞中的定位和动态分布研究。

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