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靶向VP1和VP2双拷贝shRNA重组表达质粒抑制传染性法氏囊病病毒复制的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 欧阳伟 1 ; 王永山 1 ; 马金荣 1 ; 张海彬 2 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心

2.南京农业大学动物医学院

关键词： 传染性法氏囊病病毒;RNA干扰;小发夹RNA;鸡U6启动子

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2011 年 33 卷 10 期

页码： 753-758

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为抑制传染性法氏囊病病毒(IBDV)的复制,本研究构建了靶向IBDV VP1和VP2基因的鸡双向U6启动子(chU6)双拷贝shRNA重组表达质粒pchU6-shRNA12,将其转染鸡胚成纤维细胞(CEF),再接种IBDV,72 h后,未出现细胞病变(CPE),病毒滴度小于101 TCID50/0.1mL;而转染空质粒和未转染两个对照组均出现明显的CPE,病毒滴度均达到108.75 TCID50/0.1mL。此外,将pchU6-shRNA12与IBDV混合,接种于10日龄SPF鸡胚尿囊腔,96 h后,鸡胚发育正常,病毒滴度小于101 ELD50/0.1mL,实时荧光定量RT-PCR检测VP1和VP2基因,比单纯接种IBDV组分别降低92%和95%;而含有空质粒和不含质粒两个对照组鸡胚则全部死亡,病毒滴度均达到107.00 ELD50/0.1mL。本研究结果表明,chU6启动子在双拷贝shRNA表达质粒pchU6-shRNA12中能高效驱动双拷贝shRNA的转录,生成的siRNA在CEF(in vitro)和鸡胚体内(in vivo)均能有效抑制IBDV的复制。

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