文献类型： 中文期刊

作者： 曹艳红 ¹ ; 章镇 ¹ ; 姚泉洪 ¹ ; 彭日荷 ¹ ; 熊爱生 ¹ ; 李贤 ¹ ;

作者机构： 1.南京农业大学,上海市农业科学院生物技术研究中心 上海市农业遗传育种重点实验室,上海 201106,南京农业大学,上海市农业科学院生物技术研究中心,上海市农业遗传育种重点实验室,上海市农业遗传育种重点实验室,上海市农业遗传育种重点实验室,上海市农业遗传育种重点实验室,,南京 210095,南京 210095,上海 201106,上海 201106,上海 201106,上海 201106

关键词： 双链RNAi;APPO基因;载体构建;遗传转化;苹果;荧光定量;RT-PCR

期刊名称： 实验生物学报

ISSN： 0001-5334

年卷期： 2004 年 06 期

页码： 487-493

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以成熟苹果果实的RNA为模板,经RT-PCR扩增并克隆苹果多酚氧化酶(APPO)长度为710bp的反义、正义基因片段。以副球菌中类胡罗卜素合成有关的(crtW+crtY)融合基因片段YYT为间隔区,将APPO反义基因片段、YYT和APPO正义基因片段串联,构成全长为2446bp的DNA并插入到植物双元载体pYPX145中,构成可表达苹果多酚氧化酶双链RNA的植物双元载体pYF7704。以根癌农杆菌介导的叶盘转化法转化苹果栽培品种红富士,通过50mg/L卡那霉素筛选和CUS检测,获得了转基因苹果抗性芽。荧光定量RT-PCR检测结果显示,转基因苹果抗性芽内多酚氧化酶基因的干扰效果达91.69%以上,研究结果证实多酚氧化酶双链RNA干扰在转基因苹果上是可行的。