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一步法快速构建长片段RNAi发夹的载体

文献类型： 中文期刊

作者： 刘廷利 1 ; 郭冬姝 1 ; 姚瑶 1 ; 张保龙 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院卓越创新中心

关键词： RNA干扰（RNAi）;USER酶;一步法;载体构建;基因沉默

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2021 年 005 期

页码： 1131-1136

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用RNA干扰（RNA interference, RNAi）技术可以进行基因功能研究以及作物遗传改良,但常规构建RNAi载体方法费时费力。本研究报道了一种基于USER酶一步法快速构建RNAi发夹结构的载体2301/RNAi/OS及其应用方法,操作简便,省时省力。与已报道的利用酶切连接、Gateway兼容的同源重组或PCR直接连接等构建RNAi载体相比,该载体不需要酶切片段,片段扩增完成后即可与制备好的线性化载体进行反应,缩短操作流程和时间,提高成功率;该载体对插入片段的酶切位点和长度没有要求,理论上任何位置和长度的片段均可进入2301/RNAi/OS载体中,尤其是长片段RNAi的构建。本试验以本氏烟（Nicotiana benthamiana）PDS（Phytoene desaturase）基因为例,利用农杆菌介导的瞬时表达体系验证了该RNAi能够在植物体内有效地实现基因沉默。该载体以新霉素磷酸转移酶基因（NPTII）作为筛选标记基因,可以利用卡那霉素（Kanamycin）和G418（Geneticin）等抗生素筛选转基因阳性植株,适合单子叶和双子叶植物的遗传转化。

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