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转GbVe1基因在棉花基因组中的整合与定位分析

文献类型： 中文期刊

作者： 陈天子 1 ; 凌溪铁 1 ; 杨郁文 1 ; 张保龙 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院/江苏省农业生物学重点实验室

关键词： 侧翼序列;GbVe1;棉花;插入位点

期刊名称： 棉花学报

ISSN： 1002-7807

年卷期： 2019 年 01 期

页码： 1-11

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】明确转GbVe1基因棉花的插入位点序列特征。【方法】Southern杂交筛选低拷贝基因插入的转基因棉花株系,以hiTAIL-PCR(Polymerase chain reaction)获取其T-DNA侧翼序列,然后根据获得的T-DNA侧翼序列设计特异PCR引物,验证插入位点的准确性。【结果】Southern杂交候选了T-DNA低拷贝插入的3个转基因棉花株系,hiTAIL-PCR分离到RB端侧翼序列(119~1 018 bp)、LB端侧翼序列(243~516 bp);侧翼序列的AT碱基含量在63%以上。转基因株系7/100826-152和12/100826-393插入位点都位于Gohir.D01G157600.1内含子上。转基因株系1/w-ch14插入位点分别位于Gohir.D01G157600.1内含子和A12染色体的基因间隔区中。T-DNA在Gohir.D01G157600.1内含子的插入事件造成了21 bp碱基的基因组序列缺失。T-DNA到侧翼序列的PCR产物证明Gohir.D01G157600.1上的插入位点真实可靠。【结论】hiTAIL-PCR获取了转GbVe1基因棉花的T-DNA侧翼序列,提供了T-DNA插入位点位于Gohir.D01G157600.1基因内含子的特异性检测引物。

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