文献类型： 中文期刊
作者： 王园园 1 ; 陈佳 1 ; 覃宗华 2 ; 吴彩艳 1 ; 廖申权 1 ; 戚南山 1 ; 吕敏娜 1 ; 孙铭飞 1 ; 蔡建平 1 ;
作者机构： 1.广东省农业科学院兽医研究所
2.广州英赛特生物技术有限公司
关键词： 柔嫩艾美耳球虫;裂殖子;cDNA文库;SMART技术
期刊名称： 动物医学进展
ISSN： 1007-5038
年卷期： 2012 年 33 卷 04 期
页码： 30-34
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为克隆柔嫩艾美耳球虫裂殖子阶段的功能基因的全长序列,利用SMART技术,采用Clontech公司的Creator TMSMARTTMcDNA Library Construction Kit构建了鸡球虫裂殖子的全长cDNA文库。用试剂盒提取mRNA后,以cDNA合成试剂盒合成cDNA。连接至pDNR-LIB载体,用电转化法将重组质粒转化到E.coli DH10B内得到原始文库,扩增后保存于-80℃冰箱内;最后以文库为模板,分别以研究室已成功克隆序列(EtSAG2、EtMIC-2、EtMCAT)及Sanger的部分EST序列(Contig1218)设计引物,进行PCR扩增并测序检验文库的实用性。经测定,构建的初级cDNA文库约含有8.72×107个重组子,插入的片段多在1kb～3kb之间,平均插入片段长度约1.8kb,扩增后文库保存的滴度为2.4×104 cfu/mL;通过文库的PCR扩增,不仅可以成功扩增出研究室已成功克隆的序列(EtSAG2、EtMIC-2),并成功获得EtMCAT和EST序列(Contig1218)的全长cDNA序列,经比对分析Contig1218所编码的蛋白为组织蛋白酶B样半胱氨酸蛋白酶(Cathepsin B)。结果表明,已成功构建了柔嫩艾美耳球虫裂殖子高质量的全长cDNA文库,从而为筛选鸡球虫的功能基因全长序列奠定了基础。
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