文献类型： 中文期刊

作者： 章振华 ¹ ; 于博 ¹ ; 姜北宇 ¹ ; 钱爱东 ¹ ; 李林 ¹ ; 景小冬 ¹ ; 张建伟 ¹ ;

作者机构： 1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所;吉林农业大学动物科技学院

关键词： 禽流感;H9N2;序列分析;血凝素基因

期刊名称： Agricultural Science & Technology

ISSN： 1009-4229

年卷期： 2009 年 05 期

页码： 61-64+70

摘要： [目的]测定H9N2AIV4个毒株血凝素基因序列,并进行比较分析,从分子生物学角度了解各毒株间的差异和变异规律,进而了解该亚型禽流感的分布及流行规律。[方法]参照H9N2亚型禽流感HA基因序列设计1对引物,对禽流感A/Chicken/Hebei/WD/98(H9N2)、A/Chiken/Hebei/ZD/04(H9N2)、A/Chicken/Beijing/MY/06(H9N2)和A/Chicken/Beijing/PG/08(H9N2)4个毒株HA基因进行扩增、克隆和测序,并将这4个毒株的HA基因序列分别与GenBank登录的10个H9N2亚型禽流感毒株(序列号分别为AF156376,AF156377,AF156378,AF461517,AF461519,AF461521,AF461530,AY364228,AY862606,D90305)进行比较分析,并绘制进化树。[结果]4个毒株HA基因(ORF)全长1683bp,编码561个氨基酸;4个毒株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为92.5%～95.6%和95.2%～96.8%,其中MY株和ZD株HA基因同源性和氨基酸同源性均为最高;WD株、MY株、PG株和ZD株与其他10个毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为82.6%～95.1%、83.0%～99.0%、82.7%～95.5%和81.30%～95.7%、86.6%～96.3%、86.6%～97.9%、87.0%～97.1%、86.9%～97.3%,遗传进化树分析表明,H9N2的HA基因的进化树有2个大的分支,分为2个种系:欧亚种系和北美种系。欧亚种系又分为3个群系,分别以A/Quail/HongKong/G1/97(AF156378),A/Duck/HongKong/Y439/97(AF156377)和A/Duck/HongKong/Y280/97(AF156376)为代表株,将这4个分离株与国内一些参考株、韩国代表株(AY862606)以及上述欧亚种系代表株的HA基因序列进行比较。结果表明,MY株、WD株、PG株和ZD株均属于欧亚种系,并且都属于A/Duck/HongKong/Y280/97群系,与国内参考株的亲缘关系都较近,而MY株与A/Chicken/Shandong/2/99(AF461521)亲缘关系最近。PG株与A/Chicken/Liaoning/2/00(AF461519)的亲缘关系最近,氨基酸同源性达到97%。ZD株与A/Chicken/Beijing/1/97(AF461530)的亲缘关系最近,核苷酸和氨基酸的同源性都是最高的,分别达95.7%、97.3%。韩国株(AY862606)则属于A/Duck/HongKong/Y439/97(AF156377)群系。总体来看,这4个分离株与国内参考株亲缘关系较近,而与韩国株(AF156377)较远。4个分离株除WD株的HA基因裂解位点为PSRSSR/GLF,MY、PG和ZD株的HA基因裂解位点均为PARSSR/GLF,WD株裂解位点附近的A变为S,也就是由丙氨酸变为丝氨酸,S也是非碱性氨基酸,因此,致病力没有变化,这4个分离株均为低致病性禽流感病毒。HA基因的几个受体位点分别为109aa,161aa,163aa,191aa,198aa,202aa,203aa,通过比较除了PG株的198aa为丙氨酸(Ala),其他3个都为缬氨酸(Vla)。编码198aa的3个碱基由GTG突变为GCG,其他参考株的198aa变异性也较大,A/Duck/HongKong/Y439/97(AF156377)和A/Quail/HongKong/G1/97(AF156378)的198aa都是谷氨酸(Glu),还有的国内株为T。这4个分离株的其他几个受体结合位点的氨基酸都是一样的,然而,通过对10个参考株的比较发现,191aa也容易发生变异,有的变为组氨酸(His)。202aa和203aa在所有的毒株中都比较保守。[结论]HA基因在不同毒株间具有很高的同源性。但有很多因素能够影响其HA基因的变异,从而影响其致病力,这与地域因素有很大的相关性,因此,应加强地域间的防控。