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马铃薯T-DNA插入拷贝数的检测及对农艺性状的影响研究

文献类型： 中文期刊

作者： 石建斌 1 ; 杨永智 1 ; 王舰 1 ;

作者机构： 1.青海大学农林科学院

关键词： 马铃薯;实时荧光定量PCR;拷贝数;农艺性状

期刊名称： 中国农业大学学报

ISSN： 1007-4333

年卷期： 2015 年 20 卷 06 期

页码： 68-75

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以转基因马铃薯株系为材料,采用Real-time PCR方法,以SYBR Green I为荧光染料,以马铃薯块茎贮藏蛋白基因(Patatin)作为内参基因,以植物表达载体上的潮霉素抗性基因(HPT)为筛选标记基因,建立目的基因CT值与起始模版的相关性标准曲线,通过实时荧光定量PCR分别获得每个样品中内参基因和外源基因的CT值,根据Pfaffl法计算获得了T-DNA在转基因马铃薯中的拷贝数,且与Southern blot方法进行了比较,并结合田间农艺性状,分析了外源基因拷贝数马铃薯株高及薯块产量的影响。结果表明,内参基因和外源基因标准曲线的相关系数分别为R2=0.996、R2=0.995和R2=0.990。在所测的23株转基因株系中,12株为单拷贝插入,6株为双拷贝,5株为多拷贝。Real-time PCR比Southern blot方法结果更准确、操作更简便快捷、成本更低。且插入拷贝数的多少与马铃薯田间农艺性状变化有一定的关系,发现2拷贝以上的T-DNA插入较容易引起部分性状的改变。

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