文献类型： 中文期刊
作者： 吕敏娜 1 ; 覃宗华 1 ; 袁建峰 1 ; 孙铭飞 1 ; 余劲术 1 ; 吴彩艳 1 ; 蔡建平 1 ;
作者机构： 1.广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生实验室
关键词： 鸭疫里默氏菌;甲羟戊酸激酶;表达;免疫保护
期刊名称： 畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2010 年 41 卷 08 期
页码： 1006-1011
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 在从鸭疫里默氏菌(RA)基因组文库筛选毒力基因的过程中,作者获得了编码RA甲羟戊酸激酶的基因(RAMVA),将该基因片段提交GenBank,收录号为GQ398751。测序分析结果显示其开放阅读框长492 bp,共编码163个氨基酸。根据序列信息设计引物,用PCR方法从RA中扩增出RAMVA的编码区并与表达质粒pMAL-C2X连接,构建重组质粒pMAL-RAMVA。经限制性酶切和序列测序鉴定序列正确无误后将pMAL-RAMVA转化至E.coliBL21(DE3)构建重组表达菌E.coliBL21/pMAL-C2X-RAMVA。用IPTG诱导重组菌成功诱导RAMVA的表达,通过SDS-PAGE分析表达产物,表达量占全菌总蛋白的15.6%,且重组表达的甲羟戊酸激酶在大肠杆菌中表达时以可溶性状态存在。雏鸭免疫试验表明,接种重组表达菌E.coliBL21/pMAL-C2X-RAMVA2周后,可产生对RA致死量攻击达42.3%的免疫保护率。
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