文献类型： 中文期刊

作者： 刘鸿威 ¹ ; 林昶 ¹ ; 王劭 ² ; 肖世峰 ² ; 程晓霞 ² ; 郑敏 ² ; 陈少莺 ² ; 曾显成 ¹ ; 陈仕龙 ² ;

作者机构： 1.福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)

2.福建省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 鸭;骨形态发生蛋白（BMPs）;荧光定量PCR;SYBR GreenⅠ

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2022 年 012 期

页码： 1509-1518

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】旨在建立一种检测鸭骨形态发生蛋白（BMPs）mRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RTPCR检测方法。【方法】根据GenBank中BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15的核苷酸序列设计并合成特异性引物进行PCR扩增，产物回收后克隆至pMD-18-T载体，构建阳性重组质粒作为标准品，优化SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件，建立其标准曲线，对建立的方法进行特异性、敏感性和重复性试验。【结果】建立的BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15基因实时荧光定量检测方法特异性强，无引物二聚体及非特异性产物，熔解曲线为单峰，相关系数R2均大于0.998，组间和组内变异系数均小于1%。应用该方法检测BMPs基因在半番鸭组织中的表达水平，结果显示，BMP1、 BMP2、 BMP5和BMP7基因在心脏中表达量较高，分别为5.5×10~4、 1.1×10~5、 5.1×10~5和7.7×10~5拷贝·μL^-1; BMP6和BMP10基因在肝脏中表达量较高，分别为7.5×10~4和7.6×10~3拷贝·μL^-1；而BMP3、 BMP4、BMP8a和BMP15分别在法氏囊、胸腺、喙和脾脏中表达量最高，分别为1.5×10~5、2.1×10~4、1.8×10~3和3.3×10~3拷贝·μL^-1。【结论】本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、重复性好，为检测鸭BMPs表达水平提供了技术手段。