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降解赤霉病菌毒素Tri101基因的原核表达及抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 闫海霞 1 ; 杨丽荣 2 ; 薛保国 3 ; 段立清 3 ; 孙虎 3 ;

作者机构： 1.内蒙古农业大学林学院

2.河南省农业科学院植物保护研究所河南省农作物病虫害防治重点实验室

3.河南省农业科学院植物保护研究所

关键词： Tri101基因;原核表达;多克隆抗体;Western blot

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2010 年 40 卷 05 期

页码： 469-474

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR方法克隆了编码禾谷镰刀菌单端孢酶烯3-O-乙酰转移酶Tri101基因的cDNA序列,并连接到原核表达载体pGEX-4T2上,将获得的重组载体pGEX-4T2/Tri101转化大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,经IPTG诱导后,Tri101基因在大肠杆菌BL21中获得了高效表达,融合蛋白GST-Tri101分子量为75.45 kDa。将该融合蛋白切胶纯化后免疫家兔,制备兔抗GST-Tri101多克隆抗体。经ELISA法测定抗体效价大于1∶256 000。Western blot分析表明制备的抗体与原核细胞体外表达的Tri101蛋白可以特异性结合,表明该抗体的特异性良好。应用该抗体验证了感赤霉病小麦中Tri101基因的表达。兔抗GST-Tri101抗体的成功制备,为进一步研究Tri101的生物学功能、细胞定位以及在其它植物中的表达等奠定了基础。

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