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大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆、表达及其特征分析

文献类型： 中文期刊

作者： 王玉梅 1 ; 夏建红 1 ; 黄桂菊 1 ; 喻达辉 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院

关键词： 大珠母贝;PMMG1;EF-hand结构域;融合蛋白;珍珠质

期刊名称： 海洋学报(中文版)

ISSN： 0253-4193

年卷期： 2010 年 32 卷 03 期

页码： 121-128

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： EF-hand结构域在真核生物细胞内钙离子吸收和运输中发挥重要作用,在贝类中可能参与贝壳和珍珠质的形成。根据已报道的贝类中具有EF-hand结构域的碱基序列设计简并引物,从大珠母贝外套膜cDNA文库中筛选得到PMMG1基因(大珠母贝外套膜基因1)。PMMG1基因全长618 bp,开放读码框编码140个氨基酸,N-端的22个氨基酸肽段为信号肽。PMMG1氨基酸序列与合浦珠母贝PFMG1的一致性为56%,预测有两个EF-hand结构域。选取编码PMMG1成熟蛋白的cDNA序列插入pET-32a质粒构建表达载体,通过IPTG诱导,Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,成功获得预期大小的融合蛋白。凝胶电泳迁移率的变化证明PMMG1蛋白具有结合Ca2+/Mg2+的活性,组织特异性表达表明PMMG1基因在外套膜的表达量远高于其他组织。大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆与表达研究为进一步研究该蛋白在珍珠质矿化中的作用、探讨珍珠质形成的分子生物学机制奠定了一定基础。

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