文献类型： 中文期刊

作者： 翟立文 ¹ ; 刘文枝 ² ; 许晨 ² ; 范玉顶 ² ; 江南 ² ; 周勇 ² ; 曾令兵 ¹ ;

作者机构： 1.水产科学国家级实验教学示范中心(上海海洋大学)

2.中国水产科学研究院长江水产研究所

关键词： 鲤浮肿病病毒;核蛋白编码基因P4a;环介导等温扩增;检测;优化

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2019 年 005 期

页码： 1004-1013

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究针对鲤浮肿病病毒(carp edema virus, CEV)基因组核蛋白编码基因P4a的序列,设计2对特异性引物,以克隆构建的重组质粒为标准模板,通过优化反应体系中引物浓度组合、Mg2+浓度、dNTPs浓度、反应温度和扩增时间等参数,建立了CEV环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法.结果表明,CEV-LAMP方法的最佳反应温度为62℃,引物浓度组合为引物F3/B3 0.2μmol/L,引物FIP/BIP 1.2μmol/L, Betaine0.7 mol/L, Mg2+ 8.0 mmol/L, dNTPs 1.2 mmol/L,反应时间60 min.反应产物经凝胶电泳呈现梯型条带,添加SYBR Green I荧光染料后,呈现明显的绿色阳性反应.CEV-LAMP法灵敏度高,最低检测限为10 copies/μL,较常规PCR法灵敏度高100倍; CEV-LAMP法特异性强,与锦鲤疱疹病毒(KHV)、鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)、鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)及鲤春病毒血症病毒(SVCV)无交叉反应.CEV-LAMP应用于患病鲤样本检测结果准确,简便快速,可为鲤浮肿病的现场诊断与防控提供技术支撑.