文献类型： 中文期刊

作者： 杨克礼 ¹ ; 时代 ² ; 段正赢 ¹ ; 田永祥 ¹ ; 周丹娜 ¹ ; 郭锐 ¹ ; 刘泽文 ¹ ; 袁芳艳 ¹ ; 刘威 ¹ ; 孟丽 ¹ ;

作者机构： 1.湖北省农业科学院

2.河南省信阳市浉河区畜牧局

关键词： 猪圆环病毒2型;Cap基因;克隆;原核表达

期刊名称： 江西农业学报

ISSN： 1001-8581

年卷期： 2017 年 29 卷 01 期

页码： 96-101

摘要： 利用PCV2鄂州株的基因序列设计特异性引物,分别在上、下游引物中加入Sac I和Hind III酶切位点,扩增出PCV2鄂州株的ORF2基因;将该片段克隆至p ET-28a原核表达载体,经PCR、酶切鉴定,成功构建了阳性重组表达质粒p ET-ORF2。将其转入大肠杆菌Rosetta中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析确定重组蛋白大小为34.5 k D,主要以包涵体的形式表达。优化后确定最佳诱导条件为:37℃,至OD值0.4~0.6时加入终浓度为1 mmol/L的IPTG,诱导5 h。表达产物经His-tag镍柱纯化后进行Western-blot分析,结果表明表达的重组蛋白能够与PCV2标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。