文献类型： 中文期刊

作者： 牛庭莉 ¹ ; 田媛 ¹ ; 张利国 ¹ ; 张树权 ¹ ; 李志江 ¹ ; 康悦 ¹ ; 迟建 ¹ ; 高宝昌 ¹ ; 戴凌燕 ¹ ;

作者机构： 1.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;黑龙江省科学院大庆分院植物化学研究所;黑龙江省农业科学院经济作物研究所;黑龙江八一农垦大学食品学院

关键词： 大麻;大麻二酚酸合成酶;大麻二酚;异源表达;条件优化

期刊名称： 食品工业科技

ISSN： 1002-0306

年卷期： 2023 年 44 卷 020 期

页码： 135-142

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了实现大麻二酚酸合成酶(CBDAS)的微生物底盘高效表达,为体外合成大麻二酚(CBD)提供重组酶.首先从高CBD含量大麻叶片中克隆CBDAS基因,利用生物信息学方法分析其蛋白的基本理化性质,构建重组质粒pPIC9K-CBDAS后转化毕赤酵母菌,筛选重组蛋白CBDAS高表达的培养条件,并分析CBDAS的催化活性.结果表明,构建的pPIC9K-CBDAS融合蛋白表达系统能在毕赤酵母中表达;在甲醇添加量为 1%、培养基pH6.0和培养 48h的诱导条件下表达量最大;重组酶CBDAS催化底物大麻萜酚酸(CBGA)反应 4h后大麻二酚酸(CBDA)含量显著增加(P<0.05),在 8h后 CBD含量显著增加(P<0.05),在 12h时合成 CBDA和CBD量达到最大值;CBDAS在大麻叶片大麻萜酚酸(CBGA)粗提液和CBGA标品中反应 12h后分别生成CBDA 60.64和 20.12 ng/mL,CBD 128.01和 207.87 ng/mL,具有较强的催化活性.通过酵母异源表达实现了大麻CBDAS的重组表达,为经济高效地合成CBDA和CBD提供活性酶.