文献类型： 中文期刊
作者： 邵慧鑫 1 ; 任宪云 2 ; 于振兴 1 ; 李健 2 ; 刘萍 2 ;
作者机构： 1.上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心
2.中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室
关键词： Bcl-2;低温胁迫;组织表达;RNA干扰;凋亡;日本对虾
期刊名称： 水生生物学报
ISSN： 1000-3207
年卷期： 2022 年 46 卷 008 期
页码： 1160-1167
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为研究B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma,Bcl-2)基因在内源性细胞凋亡通路中发挥的重要调控作用,实验利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得日本对虾(Marsupenaeus japonicus)MjBcl-2基因cDNA全长序列,并对其序列进行生物信息学分析;利用实时定量PCR(qPCR)技术分析了MjBcl-2在不同组织、不同水温胁迫及RNA干扰后的表达水平;同时利用TUNEL技术,检测MjBcl-2干扰后的细胞凋亡情况.结果显示:日本对虾MjBcl-2 cDNA全长为2432 bp,开放阅读框长度为726 bp,共编码241个氨基酸,分子量为26.80 kD;结构域预测分析表明MjBcl-2含有Bcl-2家族典型的保守结构域;多序列比对以及进化树构建结果表明,MjBcl-2与其他物种的相似度较高,保守性较强.定量PCR结果显示,MjBcl-2在日本对虾各个组织中均有表达,肌肉中表达量最高,鳃次之,心脏中表达量最低.低温(10℃和16℃)胁迫下日本对虾鳃和肝胰腺Bcl-2基因的表达量逐渐上升,在72h到达最高点;在干扰Bcl-2基因后,各个温度Bcl-2基因的表达量均下调,细胞凋亡基因Caspase-3的表达量显著上调(P<0.05).TUNEL检测结果表明,RNAi组和NC组(对照组)随着温度的降低,凋亡细胞数量不断增加,在28℃处理组中有少量凋亡细胞,RNAi组与NC组凋亡细胞的数量没有明显的变化,在10℃低温处理组中,RNAi组凋亡细胞的数量明显高于NC组;12h后,28℃NC组、28℃RNAi组、10℃NC组和10℃RNAi组中鳃组织的细胞凋亡率分别为1.73%、2.35%、21.59%和33.70%.研究表明,MjBcl-2在日本对虾应对低温胁迫中发挥重要作用.
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