文献类型： 中文期刊

作者： 祁喜涛 ¹ ; 李国强 ¹ ; 赵文亮 ¹ ; 樊福好 ² ; 李余良 ¹ ; 胡建广 ¹ ;

作者机构： 1.广东省农作物遗传改良重点实验室

2.农业部种猪质量监督检验测试中心

关键词： 载体构建;猪瘟;种子特异表达

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2007 年 17 卷 05 期

页码： 17-19

收录情况： CSCD

摘要： 目的:克隆猪瘟病毒表面抗原E2基因,构建种子特异表达的载体,为在玉米种子内专一表达E2蛋白奠定基础。方法:终止序列NOS经中间载体pUC18插入植物表达载体pCAMBIA-1300的XbaⅠ与EcoRⅠ位点间,得重组质粒pCAMBIA-1300-NOS,命名为pCAMBIA-1300-NOS-bar;将1.4kb的种子特异表达启动子Globulin-1插入质粒pCRR○2.1的HindⅢ与BamHⅠ位点间,得重组质粒pCR-G;将1.1kb的E2基因插入质粒pBluescriptSKⅡ的HindⅢ与BamHⅠ位点间,消除HindⅢ位点,得重组质粒pBluescriptSKⅡ-E2;用BamHⅠ和XhoⅠ从pBluescriptSKⅡ-E2中分离E2,插入pCR-G的BamHⅠ和XhoⅠ之间,得重组质粒pCR-G-E2;用HindⅢ和XbaⅠ从pCR-G-E2中分离2.5kb的片断,插入载体pCAMBIA-1300-NOS-bar中,得玉米种子特异表达载体pCAMBIA-1300-GEN。结果:对重组质粒pCAMBIA-1300-GEN经酶切、测序鉴定正确无误。结论:成功构建了种子特异表达载体并将其导入根癌农杆菌LBA4404,为在种子内特异表达猪瘟主要抗原蛋白的转基因植物新品种奠定了基础。