文献类型: 中文期刊
作者: 李亚军 1 ; 罗秋兰 1 ; 费小雯 2 ; 邓晓东 2 ;
作者机构: 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所
2.中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室
关键词: Femu2p;莱茵衣藻;重叠延伸PCR;基因克隆;原核表达;缺铁应答
期刊名称: 生物技术
ISSN: 1004-311X
年卷期: 2014 年 06 期
页码: 18-23
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: [目的]克隆莱茵衣藻缺铁应答基因Femu2p,构建重组表达载体p GEX-6p-1-Femu2p,优化条件使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。[方法]提取莱茵衣藻CC425的总RNA后,利用RT-PCR和两次重叠延伸PCR相结合的方法获得Femu2p的全长编码区,构建原核表达载体p GEX-6p-1-Femu2p,并将其转入大肠杆菌DL21(DE3)中,利用IPTG诱导融合蛋白的表达并优化表达条件。[结果]Femu2p的全长编码区为2 904 bp,编码967个氨基酸,理论分子量为100.4 k Da,理论等电点为8.86。序列分析结果显示该蛋白属于包含多个C2H2类型锌指结构域的Ran BP2家族。IPTG诱导融合蛋白表达的最佳条件为:IPTG浓度0.25 mmol/L,诱导温度16℃,诱导时间8 h。[结论]成功克隆了Femu2p基因的全长编码区,并使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。
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