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橡胶草基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

文献类型： 中文期刊

作者： 李若霖 1 ; 崔百明 2 ; 王颖 3 ; 张秀春 3 ; 陈雄庭 3 ; 吴坤鑫 3 ;

作者机构： 1.海南大学农学院

2.石河子大学生命科学学院

3.中国热带农业科学院热带生物技术研究所/农业部热带生物技术重点开放实验室

关键词： 橡胶草;DNA提取;RAPD;反应体系

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2011 年 27 卷 27 期

页码： 239-244

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探索适合橡胶草基因组DNA的提取方法和RAPD反应体系。采用改良CTAB法提取橡胶草叶片总DNA,得到的DNA能满足RAPD分析需要。通过单因子实验法分析DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶以及Mg2+浓度对RAPD扩增结果的影响,建立了适合于橡胶草RAPD分子标记的最佳反应体系,即20μL体系中包括:模板DNA30ng、TaqDNA聚合酶1.75U、dNTPs浓度0.25mmol/L、Mg2+浓度2.0mmol/L、引物浓度0.5μmol/L、10×PCRBuffer2.0μL。RAPD扩增反应程序为:94℃预变性5min,94℃30s,37℃30s,72℃70s,45个循环,最后72℃延伸7min。该反应体系具有较好的稳定性及可重复性。

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