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XJT-9503高温中性蛋白酶基因Gp1的克隆、表达及序列分析

文献类型： 中文期刊

作者： 冯蕾 1 ; 杨新平 1 ; 古丽努尔 1 ; 陈竞 1 ;

作者机构： 1.新疆农科院微生物所

关键词： 地衣芽孢杆菌;高温中性蛋白酶;基因的克隆和表达;序列分析;大肠杆菌

期刊名称： 皮革科学与工程

ISSN： 1004-7964

年卷期： 2005 年 04 期

页码： 26-30

摘要： 试验根据地衣芽孢杆菌XJT9503的高温中性蛋白酶酶蛋白所测定的N-端及部分肽段氨基酸序列及质谱分析结果设计了PCR引物,用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增了高温中性蛋白酶基因Gp1,对所获得的基因进行序列分析测定,并与蛋白酶的氨基酸序列分析对比。GP1基因全序列共1129bp,包括整个阅读框,共编码376个氨基酸。将扩增的DNA片段插入到大肠杆菌载体pET-28a中,构建成重组分泌型表达载体pGp1。并在大肠杆菌宿主BL21中得到表达。SDS-PAGE分析显示产物的分子量为27.0×103,同核酸序列测定所推导的值相符。同时,对地衣芽孢杆菌XJT9503中性蛋白酶基因序列进行了测定和比较分析,发现与地衣芽孢杆菌6816丝氨酸蛋白酶和地衣芽孢杆菌1411T角蛋白水解酶基因的同源性为97%。

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