文献类型： 中文期刊
作者： 代蓉 1 ; 沈思军 2 ; 甘尚权 1 ; 毛青青 1 ; 万鹏程 1 ;
作者机构： 1.新疆农垦科学院畜牧兽医研究所
2.石河子大学动物科技学院
关键词： 组织特异;RNAi;转基因小鼠模型
期刊名称： 中国科学:生命科学
ISSN： 1674-7232
年卷期： 2011 年 04 期
页码： 289-295
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： RNAi是一种行之有效的基因沉默的新方法,被广泛地应用于基因功能的研究、疾病的治疗以及新型疫苗的研制等领域.本研究通过原核显微注射干扰载体的方法制备转基因小鼠.选用皮肤组织特异表达的人源角蛋白14(K14)基因启动子(2000bp)作为表达载体启动子,成功地驱动融合表达载体EGFP-shRNA进行干扰片段前体的转录,进而生成成熟的干扰片段,靶向小鼠BMP4基因使其发生沉默.所得到的转基因小鼠及其杂交后代经PCR和Southern杂交鉴定,结果表明外源基因准确无误地整合到小鼠基因组.Northern杂交结果证明,小干扰RNA在皮肤组织中有较高水平的表达,在肺和肠组织中有较低水平的表达.研究结果表明,利用PolⅡ型(K14)启动子驱动shRNA融合转录本的表达,在特定组织高表达siRNA,从而达到抑制特定组织目的基因表达的技术路线是可行的.同时为利用K14启动子进行毛囊相关基因干扰研究积累了基础数据,为制备组织特异抑制基因表达的转基因大家畜提供了一个参考方法.
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