文献类型： 中文期刊

作者： 陈龙军 ¹ ; 林陈强 ¹ ; 张慧 ¹ ; 贾宪波 ¹ ; 方宇 ¹ ; 陈济琛 ¹ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院土壤肥料研究所

关键词： 枯草杆菌工程菌;α-环糊精葡萄糖基转移酶;表达;优化

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2019 年 05 期

页码： 600-605

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】构建分泌表达α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)的重组枯草芽胞杆菌,实现α-CGTase的安全高效表达。【方法】通过PCR法扩增嗜热地芽胞杆菌α-CGTase基因,运用EcoRI/Xho I分别对α-CGTase基因及pBES进行双酶切,然后将该基因片段插入到大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭载体pBES中,再电转化法转化枯草芽胞杆菌RIK1285;对重组枯草芽胞杆菌B.subtilis RIK1285/pBE-CGT发酵条件进行探索。【结果】(1)利用发酵培养基分泌表达α-CGTase,重组枯草芽胞杆菌工程菌B.subtilis RIK1285/pBE-CGT发酵上清液产酶达到2.9U·mL~(-1)。(2)TB为最适发酵培养基(配方:甘油0.5%,蛋白胨1.2%,酵母粉2.4%,K_2HPO_4 1.64%,KH_2PO_40.23%);在初始pH 6.5,温度为37℃下,摇瓶发酵培养24h后,α-环糊精酶的环化活性达到5.3U·mL~(-1),是野生菌株嗜热地芽胞杆菌(0.66U·mL~(-1))的8倍。【结论】成功构建了枯草芽胞杆菌B.subtilis RIK1285/pBE-CGT工程菌,并确定其最适发酵培养基和培养条件。