文献类型： 中文期刊

作者： 周勇 ¹ ; 范玉顶 ¹ ; 徐进 ¹ ; 马杰 ¹ ; 江南 ¹ ; 刘文枝 ¹ ; 曾令兵 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院长江水产研究所

关键词： 鲤疱疹病毒Ⅱ型;ORF 4;原核表达;多克隆抗体;免疫荧光检测

期刊名称： 淡水渔业

ISSN： 1000-6907

年卷期： 2017 年 47 卷 01 期

页码： 61-65

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据鲤疱疹病毒II型(Cyprinid herpesvirus Ⅱ,Cy HV-2)ORF 4基因序列(Gen Bank:JQ815364.1)设计特异性引物,PCR扩增得到ORF 4基因编码框全长序列1 041 bp,将其克隆至原核表达载体p ET-32a(+)中,构建了重组原核表达载体p ET-32a-ORF 4。将p ET-32a-ORF 4重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到融合表达的重组蛋白,融合表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,其分子质量约为57 ku,与预期大小一致。将纯化的重组蛋白免疫日本大耳兔,制备了多克隆抗体,ELISA检测抗体效价大于1∶50 000,Western blot检测显示该抗体可以特异性识别重组蛋白。间接免疫荧光检测结果表明:该多克隆抗体可与由Cy HV-2感染引起细胞病变的异育银鲫脑组织细胞(GICB)发生特异性的结合。