文献类型： 中文期刊

作者： 才羿 ¹ ; 戴冬洋 ¹ ; 谭海 ¹ ; 王迪 ² ; 杨芬 ¹ ; 王岭 ¹ ; 盛云燕 ¹ ;

作者机构： 1.黑龙江八一农垦大学

2.黑龙江省农业科学院大庆分院

关键词： 甜瓜;ABORTED MICROSPORES(AMS);生物信息学;载体构建

期刊名称： 新疆农业科学

ISSN： 1001-4330

年卷期： 2023 年 60 卷 001 期

页码： 61-68

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]研究鉴定甜瓜雄性不育候选基因ABORTED MICROSPORES(AMS)的基因家族,分析CRISPR基因编技术并构建其敲除载体,为甜瓜雄性不育基因AMS功能验证提供依据.[方法]采用生物信息学技术鉴定甜瓜雄性不育候选基因ABORTED MICROSPORES(AMS)家族基因,分析其进化关系、保守基序及理化性质.利用CRISPR/Cas9基因编辑技术以甜瓜AMS基因外显子区设计gRNA引物,以载体pHSN401为模板,扩增获得sgRNA克隆框,使用Bsa Ⅰ酶切pHSN401载体,利用DNA重组酶构建重组载体并转化农杆菌,挑选单克隆进行培养,随后进行菌液PCR鉴定.[结果]甜瓜AMS基因编码的蛋白质长度从501~605 aa不等,平均分子量约为59 351 Da,等电点为5.04~6.45,甜瓜大部分AMS基因定位在细胞核;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在AMS基因的CDS区设计3个靶位点,分别是AMS-pHSN401-1、AMS-pHSN401-2和AMS-pHSN401-3.[结论]AMS基因主要被预测在细胞核中表达,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建甜瓜敲除重组载体AMS-pHSN401并转化农杆菌,获得阳性克隆.