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小麦Pinb基因启动子区CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 张淑娟 1 ; 张荣志 1 ; 宋国琦 1 ; 李玉莲 1 ; 高洁 1 ; 李玮 1 ; 高世庆 1 ; 李根英 1 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院作物研究所/农业部黄淮北部小麦生物学与遗传育种重点实验室/小麦玉米国家工程实验室;北京杂交小麦工程技术研究中心

关键词： 小麦;CRISPR/Cas9;基因编辑;Pinb基因

期刊名称： 山东农业科学

ISSN： 1001-4942

年卷期： 2020 年 01 期

页码： 1-9

摘要： CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术已经逐渐成熟并在多种植物中得到成功应用,促进了基因功能的研究。小麦籽粒硬度是决定小麦加工品质的重要性状,Pinb是控制籽粒硬度的关键基因之一。本研究以小麦Pinb基因为对象,联合采用常规PCR和Golden Gate cloning技术,构建了包含小麦Pinb基因启动子区双靶点的CRISPR/Cas9基因编辑载体。将重组载体转入小麦原生质体中进行sgRNA活性的检测,在两个靶点位置均发生了突变,编辑效率分别为4. 57%和4. 37%,基因编辑类型包括碱基替换和碱基缺失。该研究为在小麦中实现Pinb基因的定点突变奠定了基础,对其功能研究和小麦品质改良均具有重要意义。

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