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一种快速高效的水稻原生质体制备和转化方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 段炼 1 ; 钱君 2 ; 郭小雨 3 ; 朱英 4 ;

作者机构： 1.浙江师范大学化学与生命科学学院

2.浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所

3.浙江省植物有害生物防控重点实验室

4.省部共建国家重点实验室培育基地

关键词： 水稻;原生质体;自沉降法

期刊名称： 植物生理学报

ISSN： 2095-1108

年卷期： 2014 年 50 卷 03 期

页码： 351-357

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在模式植物拟南芥中,原生质体瞬时表达技术已被广泛地应用到功能基因组学的研究中,但水稻原生质体因其制备过程相对繁琐,转化效率偏低,尚未在基因功能研究中获得广泛应用。本研究在拟南芥原生质体制备和转化的基础之上,对水稻原生质体的制备和转化方法进行改良优化。以水稻幼茎为起始材料,采用纤维素酶R-10和果胶酶R-10,对水稻组织进行消化并利用蔗糖密度梯度自沉降的方法分离原生质体,获得了高纯度的原生质体。对质粒转化原生质体时的转化方法、转化时间及质粒浓度进行探索,在缩短原生质体分离时间的同时,大大提高了转化效率。用较少量的质粒DNA即可获得外源基因在原生质体内高效的表达,且转化效率可达70%。我们建立的这种快速有效的水稻原生质体制备和转化方法,可为水稻功能基因组学研究提供技术支持。

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