文献类型： 中文期刊

作者： 汪涵 ¹ ; 吴伟怀 ¹ ; 杨旭光 ¹ ; 杨先锋 ¹ ; 李锐 ¹ ; 郑金龙 ¹ ; 黄兴 ¹ ; 梁艳琼 ¹ ; 贺春萍 ¹ ; 易克贤 ¹ ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室;海南大学热带农林学院;农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室农业部儋州热带作物科学观测实验站;宁夏出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心

关键词： 甘蔗褐锈病;黑顶柄锈菌;巢式PCR分子检测

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2017 年 12 期

页码： 2334-2339

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法,本研究利用真菌DNA内源转录间隔区通用引物ITS1/ITS4扩增甘蔗黑顶柄锈菌DNA,并对其扩增产物进行克隆测序,获得序列于NCBI网站进行比对分析,并于该序列多态性丰富区域设计了2对引物PM2F/R、PM3F/R。通过对同寄主不同病原菌、以及不同属的锈菌DNA进行PCR检测以验证引物的特异性。结果表明,在优化的单一PCR反应体系与程序条件下,2对引物均仅能从甘蔗黑顶柄锈菌中扩增出约474 bp和363 bp的特异条带,而从其它真菌DNA中均扩增不出任何条带。进一步将引物PM2F/R作为第一轮扩增引物、PM3F/R作为第二轮扩增引物进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达0.001 ng/μL,较常规PCR提高100倍。由此表明,依据本研究所设计的2对引物而建立的快速、灵敏、准确的甘蔗黑顶柄锈菌的检测技术,对病原菌的早期诊断、快速检测及病害流行学研究具有重要意义。