文献类型： 中文期刊
作者： 范方军 1 ; 李文奇 1 ; 朱金燕 2 ; 王军 1 ;
作者机构： 1.江苏省农业科学院粮食作物研究所
2.江苏省农业科学院粮食作物研究所国家水稻改良中心南京分中心
关键词： CRISPR/Cas9;稻瘟病;Pi21;基因敲除
期刊名称： 中国水稻科学
ISSN： 1001-7216
年卷期： 2016 年 30 卷 05 期
页码： 469-478
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 利用CRISPR/Cas9技术,针对Pi21基因的两个靶位点(靶位1和靶位2),构建基因敲除载体,转化水稻品种南粳9108。经PCR鉴定,获得了28株T0代阳性转基因植株。对靶位点酶切检测发现,靶位1突变效率为78.57%,靶位2突变效率为92.86%;靶位1和靶位2同时突变的效率为78.57%,突变效率较高。通过对靶位点进行测序,发现靶位点突变类型较多,包括碱基缺失、碱基插入、碱基缺失后插入其他碱基和大片段DNA缺失等类型。对突变株系进行氨基酸预测,发现大部分株系都存在移码突变现象而使基因突变彻底,少数株系表现为部分氨基酸的缺失或变异。成功敲除了水稻Pi21基因,并对突变效率和类型进行了分析,为进一步验证Pi21基因功能、培育广谱抗稻瘟病的水稻新品系奠定了基础。
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