文献类型： 中文期刊

作者： 陈佳 ¹ ; 戚南山 ² ; 廖申权 ² ; 吴彩艳 ² ; 吕敏娜 ² ; 李娟 ² ; 吴玄光 ¹ ; 孙铭飞 ² ;

作者机构： 1.华南农业大学兽医学院

2.广东省农业科学院动物卫生研究所

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;二氢乳清酸脱氢酶;电子克隆;原核表达

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2013 年 34 卷 07 期

页码： 35-38

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)是催化嘧啶从头合成途径中的关键酶,由于顶复门原虫等低等生物与其宿主的DHODH在分子结构上的差异,可以作为研发新型抗顶复门原虫药物的靶标而成为研究的热点。本研究利用电子克隆策略,以疟原虫DHODH氨基酸基因序列为信息探针,搜索球虫基因库(www.sanger.ac.uk/projects/E-tenella/),拼接注释了柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)DHODH的基因序列,以E.tenella广东株第2代裂殖子总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增获得EtDHODH ORF基因序列。构建重组表达载体pColdⅠ-EtDHODH,进行原核表达。测序结果显示,EtDHODH的基因大小为1 254bp,SDS-PAGE鉴定结果表明,目的蛋白约45ku。本研究重组表达并纯化了EtDHODH基因,为建立以EtDHODH为靶点的抗球虫药物筛选奠定了基础。