文献类型： 中文期刊

作者： 王洪哲 ¹ ; 殷倩茜 ¹ ; 冯志纲 ² ; 李大宇 ¹ ; 孙效文 ¹ ; 李婵 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

2.大连水产学院生命科学与技术学院

关键词： 黑斑狗鱼;微卫星;磁珠富集

期刊名称： 动物学研究

ISSN： 0254-5853

年卷期： 2008 年 29 卷 03 期

页码： 245-252

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用磁珠富集与放射性杂交相结合的方法开发黑斑狗鱼(Esoxreieherti Dybowski)基因组微卫星资源。基因组DNA经Sau3AⅠ限制性内切酶消化后,选取400―900bp的片段进行PCR全基因组扩增,并利用生物素标记的(CA)12、(GA)12探针进行微卫星片段的富集。将得到的片段与pGEM-T载体连接后转入DH5α大肠杆菌中,然后利用γ-32P标记的放射性同位素探针进行第二次杂交。结果,共获得微卫星基因组文库1600个菌,杂交前菌落PCR检测阳性克隆率为90.91%;杂交后得到的阳性克隆为1300个,占87.25%。从中挑出196个进行测序,192(97.96%)个含有微卫星序列。在得到的微卫星序列中,重复单元除CA/GT、GA/CT外,还观察到单碱基、四碱基、五碱基重复单元。根据侧翼序列应用引物设计软件PrimerPremier5.0设计引物70对,选择合成32对,通过优化PCR反应条件,结果有28对引物可扩增出清晰可重复的目的条带。本研究旨在对黑斑狗鱼基因组资源的开发利用起到一定的促进作用,并为黑斑狗鱼养殖品系的优化、遗传多样性的检测及遗传图谱的构建等奠定基础。