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龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 帅良 1 ; 李静 1 ; 韩冬梅 2 ; 吴振先 1 ;

作者机构： 1.华南农业大学园艺学院

2.广东省农业科学院果树研究所

关键词： 龙眼;己糖激酶;基因克隆;荧光定量PCR;原核表达

期刊名称： 华南农业大学学报

ISSN： 1001-411X

年卷期： 2015 年 36 卷 03 期

页码： 91-97

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆龙眼Dimocarpus longan己糖激酶(Hexokinase,HXK)基因,并对其进行生物信息学分析及原核表达分析.【方法】以龙眼总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE法获得基因全长c DNA序列,构建p ET-32a-Dl HXK原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达.【结果和结论】成功克隆龙眼己糖激酶基因的c DNA全长序列,命名为Dl HXK,登录号为KF776906.1.龙眼Dl HXK序列全长2 101 bp,包括1个1 488 bp的开放阅读框,预测编码495个氨基酸;进化树和相似性分析发现,该基因与温州蜜柑Citrus unshiu的相似性最高,达到了82%;荧光定量表达分析表明,Dl HXK基因随着果实的发育成熟表达量逐渐上升;经IPTG诱导和SDSPAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白大小相吻合.由此可见,利用RT-PCR结合RACE方法成功克隆了龙眼的己糖激酶基因,构建原核表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中获得高效表达.

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