文献类型： 中文期刊
作者： 唐永凯 1 ; 俞菊华 1 ; 徐跑 1 ; 李建林 2 ; 李红霞 2 ; 董在杰 2 ; 任洪涛 1 ;
作者机构： 1.南京农业大学无锡渔业学院
2.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心
关键词： 建鲤;内参基因;β-actin;实时荧光定量PCR
期刊名称： 浙江农业学报
ISSN： 1004-1524
年卷期： 2013 年 25 卷 01 期
页码： 31-36
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： β-actin在真核细胞的生理过程中起着重要的作用,其表达范围广、表达量恒定,常作为内参基因应用于real time PCR中。本文通过RT-PCR克隆出建鲤(Cyprinus carpio var.jian)β-actin的部分cDNA序列,其长度为424 bp,翻译成138个氨基酸,计算的蛋白质分子量为15.4 ku。氨基酸同源性分析显示,建鲤β-actin与斑马鱼(Danio rerio)相似性最高,为99.3%。与其他鱼的相似性也较高,为97.8%～98.6%。同时也克隆出了建鲤β-actin相应的DNA序列,其长度为590 bp。cDNA和DNA的序列比对显示克隆出的建鲤β-actin含有2个内含子,设计一对跨越内含子的引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了real time PCR方法。以肝脏cDNA为标准品,建立了标准曲线,并进行了溶解曲线分析。结果表明,所建立的方法具有特异性强、相关系数高、线性范围广等优点,可应用于建鲤的功能基因表达研究。
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