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拟南芥中柯浩体蛋白Atcoilin的克隆、表达及纯化

文献类型： 中文期刊

作者： 张静 1 ; 田兆丰 2 ; 朱文壮 1 ; 张飞云 1 ;

作者机构： 1.首都师范大学生命科学学院

2.北京市农林科学院植物保护环境保护研究所

关键词： Atcoilin蛋白;表达;纯化;标志蛋白

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2012 年 0 卷 03 期

页码： 63-68

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在制备柯浩体的标志蛋白——Atcoilin蛋白,利用pET-28a与目的基因构建重组表达质粒,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,产物用SDS-PAGE及Western blotting分析鉴定。通过分别改变IPTG的浓度、培养时间、培养温度等来优化Atcoilin蛋白的表达条件。表达出的重组蛋白经过镍柱、分子筛进行纯化。结果显示,原核表达载体pET28a-At1g13030成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相应的重组蛋白经Western blotting鉴定正确。在IPTG浓度为0.7 mmol/L,18℃培养20 h的条件下,目的蛋白表达量最高。经过SDS-PAGE分析鉴定,过镍柱、分子筛后得到的重组蛋白纯度较高。

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