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儿茶酚双加氧酶基因大肠杆菌表达体系研究

文献类型： 中文期刊

作者： 熊爱生 1 ; 彭日荷 1 ; 耿其芳 1 ; 李贤 1 ; 范惠琴 1 ; 姚泉洪 1 ;

作者机构： 1.上海市农业遗传育种重点实验室

关键词： 儿茶酚双加氧酶基因;克隆;表达;酶活分析

期刊名称： 上海农业学报

ISSN： 1000-3924

年卷期： 2003 年 19 卷 02 期

页码： 1-4

收录情况： CSCD

摘要： 从恶臭假单孢菌 (Pseudomonassp .S 47)的DNA中扩增得到 92 4bp编码儿茶酚双加氧酶的基因片段 ,将其构建入 pBluescriptSK载体 BamHI和 SacI位点间。测序结果显示与Kim ( 2 0 0 0 )报道一致。将该基因插入带庆大霉素抗性基因启动子和t1t2终止子载体pG2 5 1、分别带ompA和EAP信号肽、lpp和Gmr 启动子载体 pYF3 95和 pYF5 2 5 4中 ,构建组成型表达载体pG2 5 1,分泌型表达载体 pYFX1,pYFX2。酶活测定结果显示pG2 5 1为 665mu/mL ,pYFX1,pYFX2分别为 1815mu/mL ,10 15mu/mL。SDS PAGE电泳显示表达蛋白产物的分子量约为 3 5kD。分泌型表达载体pYFX1表达量大于 pYFX2 ,组成型表达载体 pGX1由于使用弱启动子表达量较低

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