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薇甘菊几丁质酶基因的原核表达及活性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 李冬梅 1 ; 彭少麟 2 ;

作者机构： 1.广东省农业科学院花卉研究所

2.中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室

关键词： 薇甘菊;几丁质酶基因;融合蛋白;原核表达

期刊名称： 西北植物学报

ISSN： 1000-4025

年卷期： 2010 年 30 卷 05 期

页码： 40-46

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将薇甘菊Mmchi1基因cDNA序列的编码区插入到原核表达载体pET-32a(+)中,构建融合表达质粒,并在大肠杆菌中进行了融合蛋白6×His-Mmchi1的诱导表达、Western blot和酶活性分析.结果表明,0.1 mmol/LIPTG、25℃诱导4 h,在大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中能获得可溶性的6×His-Mmchi1;Western blot证实表达的6×His-Mmchi1能与抗6×His的单抗发生特异性反应,分子量约为55 kD,与预测的融合蛋白分子量相符;纯化后的6×His-Mmchi1最佳酶活性pH和温度分别为5.5~6.5和35~40℃.为进一步研究融合蛋白6×His-Mmchi1的功能奠定了基础.

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