文献类型： 中文期刊

作者： 刘可欣 ¹ ; 王超 ² ; 张傲 ¹ ; 刘佳利 ¹ ; 谭斌 ¹ ; 张淑琴 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院特产研究所

2.黑龙江省农业科学院

关键词： 牛病毒性腹泻病毒（BVDV）;全基因组测序;病毒分离;免疫荧光鉴定;遗传进化分析

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 003 期

页码： 1150-1159

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】查明并掌握辽宁地区牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）的流行特性及生物学特点，为BVDV的防治提供理论基础和技术支持。【方法】采集辽宁省某养牛场疑似发生BVDV感染的病死牛脾脏组织，用牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus, IBRV）、牛呼吸道合胞体病毒（Bovine respiratory syncytial virus, BRSV）、牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3）及BVDV基因特异性引物进行RT-PCR鉴定，将组织液接种MDBK细胞分离病毒。对细胞进行细胞病变效应（CPE）观察后再通过电镜观察、间接免疫荧光试验（IFA）鉴定病毒，PCR扩增病毒全基因组序列并对其进行遗传进化分析。【结果】BVDV特异性引物RT-PCR鉴定结果为阳性，在280 bp处有条带，与预期条带大小相符，其余病原特异性引物未扩增出条带，证明未感染其他病原；分离得到的毒株在MDBK细胞中培养未出现明显细胞病变效应；病毒纯化后，经电镜观察可见直径约为50 nm的病毒粒子；免疫荧光试验结果显示，在接种分离毒株的MDBK细胞内可观察到亮绿色荧光，而对照细胞没有荧光，将分离得到的病毒命名为LN-1株；全基因组扩增序列大小为12 269 bp,遗传进化分析发现，LN-1株与XC、SD-15及ZM-95株在同一分支，与XC株核苷酸相似性为96.2%,属于BVDV-1m型。【结论】本研究成功分离出1株1m型BVDV毒株，对后续疫苗研发、流行病学调查及致病机理等方面研究具有重要意义。