文献类型： 中文期刊

作者： 苏胜彦 ¹ ; 陈为先 ¹ ; 马佳璐 ¹ ; 张勇 ¹ ; 胡鹏晨 ¹ ; 闻剑旻 ¹ ; 张成锋 ² ; 董在杰 ¹ ; 袁新华 ¹ ; 徐跑 ¹ ;

作者机构： 1.南京农业大学无锡渔业学院

2.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业种质资源利用重点实验室

关键词： 绿色荧光蛋白;慢病毒载体;IGF2b;标记效果

期刊名称： 上海海洋大学学报

ISSN： 1674-5566

年卷期： 2012 年 21 卷 03 期

页码： 331-336

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以水母绿色荧光蛋白基因为模板进行PCR扩增得到目的基因(Green fluorescence protein,GFP),然后加上酶切位点BamHI和NheI,构建pLenti6.3-IRES-EGFP载体,转染DH5α感受态细胞进行菌落PCR,取阳性进行酶切鉴定,再取呈阳性的质粒进行测序,使用浓度为1μg/μL的质粒与慢病毒表达载体进行连接,通过荧光显微镜观察到绿色荧光,表明本实验获得的GFP和慢病毒载体整合成功;用此转染293T细胞,通过荧光显微镜同样检测到了绿色荧光。使用建鲤的组织提取RNA,然后按照Fermentas公司的M-MLV操作说明书进行反转录,得到IGF2b基因后加酶切位点进行扩增,将IGF2b整合到用GFP作为标记基因的慢病毒载体上,再以此转染建鲤未分裂的受精卵,48 h后通过荧光显微镜也观察到了绿色荧光蛋白的表达。试验表明绿色荧光蛋白在IGF2b基因慢病毒载体感染鲤受精卵中的标记是成功的。这些结果为基于含有GFP慢病毒转基因鱼育种技术的开发奠定了基础。