文献类型： 中文期刊
作者： 林湛松 1 ; 王小明 1 ; 龚殿 1 ; 刘志昕 2 ;
作者机构： 1.海南大学环境与植物保护学院
2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所＼农业部热带作物生物技术重点开放实验室
关键词： 香蕉条斑病毒;酵母双杂交;诱饵质粒;自激活鉴定
期刊名称： 热带农业科学
ISSN： 1009-2196
年卷期： 2011 年 31 卷 06 期
页码： 45-49
摘要： 以连接在pMD-18T载体上的香蕉条斑病毒(BSV)全基因组为模板,PCR扩增得到了带有Gateway R重组反应接头序列的香蕉条斑病毒ORFⅠ及ORFⅡ基因片段,经过BP、LR重组后,构建成带有目的片段的酵母双杂诱饵质粒pDEST32-O1及pDEST32-O2。将质粒转化E.coli DH5α感受态细胞,筛选序列和编码框均正确的重组质粒。将以上2种正确的重组质粒分别与用于构建诱饵质粒的pDEST22空质粒共转化酵母MaV203感受态细胞,利用营养缺陷培养基(SC-Leu-Trp)筛选转化子,并对转化子进行毒性鉴定、自激活鉴定以及3-AT抑制浓度鉴定。结果显示,2种转化子均生长正常,说明所构建的2个重组质粒表达蛋白对酵母无毒性作用,其在特异营养缺陷培养基(SC-Leu-Trp-Ura)中无法生长,不能产生自激活现象,3-AT抑制浓度分别为50、75 mmol/L。以上结果说明所构建的2种诱饵质粒均可用于后续酵母双杂工作,为BSV与宿主的蛋白互作奠定了基础。
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